Epinephrine 합성효소인 phenylethanolamine N-methyltransferase의 인간 genomic DNA의 유전자 크로닝

Molecular Cloning of Human Genomic DNA for Epinephrine Synthesizing Enzyme, Phenylethanolamine N-Methyltransferase

카테콜아민 생합성에 관여하는 마지막 효소인 phenylethanolamine N-methyltransferase는 Norepinephrine을 epinephrine으로 전환시키는 중요한 효소이다. PNMT효소의 발현은 epinephrine 신경세포의 발현에 필수적이다. 따라서 PNMT유전자를 크로닝하여 그 구조를 결정하고, 유전자 발현연구를 하는 것은 상당히 중요한 일이다. 그러나 최근에 저자가 bovine cDNA를 처음으로 분리하여 그 구조를 보고한 것 외에는 아직까지 인간 PNMT cDNA나, 전체 genomic DNA의 분리 보고는 없다. 이에 저자들은 인간 PNMT유전자의 전체구조와 여러 종(species) 사이의 진화적인 관계를 규명하기 위해서 human genomic library(Charon 4A)를 만들고, 이 library 이용하여 bovine cDNA를 probe로 13.1 Kb길이의 genomic clone을 분리 크로닝하는데 성공하였다. 이 유전자는 두개의 EcoRI site가 포함되어 있어서, EcoRI제한효소에 의해서 7.5 Kb, 5.0 Kb,0.6 Kb로 분리되었으며, Southern과 dot blot 실험 에서 보면 5.0 Kb와 0.6 Kb에 exon이 흩어져 존재하고 있으며, 7.5 Kb는 flanking sequence로 판명되었다.

To obtain information about the structure of the human phenylethanolamin N-methyltransferase (PNMT) and to further define the extent of the evolutionary relationships among PNMT molecules of several spesies, a full length cDNA clone for bovine adrenal PNMT was used to screen a charon 4A genomic library. One phage was isolated and identified, which included the entire PNMT gene. The length of inserted genomic DNA was 13.1-Kilobase (Kb) containing two internal EcoRI sites. Construction of a restriction map and subsequent Southern and dot blot analysis with 5'-and3'-specific cDNA probes allowed the identification of exon-containing fragments. This is the first report of the cloning of gene for human epinephrine synthesizing enzyme.