Applied Microscopy
- Volume 31 Issue 2
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- Pages.185-197
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- 2001
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- 2287-5123(pISSN)
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- 2287-4445(eISSN)
The Fixation Effects in Immunohistochemistry and Electron Microscopy Using Low Energy of Microwave (LEM) in Human Gastric Adenocarcinoma and HeLa Cell
사람 위선암과 HeLa 세포에 관한 저에너지 마이크로파 고정효과의 조직화학 및 전자현미경적 연구
- Yang, Seung-Ha (Department of Pathology, College of Medicine, Soonchunhyang University) ;
- Son, Tae-Ho (Department of If Engineering, College of Engineering, Soonchunhyang University) ;
- Shin, Kil-Sang (Department of Life Science, College of Natural Science, Soonchunhyang University)
- Published : 2001.06.01
Abstract
Human gastric adenocarcinomas are fixated with low energy of microwave (LEM) to study fixation effects in level of ultrastructure and antigenicity of the cancer. For the Ag-Ab reactions , the LEM fixated sdenocarcinomas are incorporated with monoclonal mouse anti-human p53 (IgG2b, kappa) and rabbit anti human cerbB-2. The retrieval of antigenicity are easily recognizable in the LEM fixated sections compared with that of frozen sections which show often diffused colour reactions. And the LEM fixation methods have preserved ultrastructures of the adenocarcinoma, but it was often difficult to maintain constancy in fixation effects. For the constancy, LEM was coupled with low concentration of chemical fixatives, such as glutaraldehyde (<1%) and
여러 가지 장점이 있음에도 일정성이 유지되지 않는 다는 단점이 있는 마이크로파 고정 효과를 "저에너지 마이크로파"를 사용하여 보완하고자 하였다. 이를 위해 사람 위선암(gastric adenocarcinoma)을 저 에너지 마이크로파(low energy of microwave, LEM)로 고정하여 미세구조와 항원-항체반응 수준에서 그 효과를 관찰하고자 하였다. LEM으로 고정한 시료에서 항원-항체반응은 monoclonal 생쥐-항-사람-p53 (IgG2b, kappa)과 토끼-항-사람-c-erbB-2로 처리하여 결과를 냉동 절편과 비교하였다. 암세포 특이 항원은 LEM으로 처리한 시료에서 발색반응 산물의 확산이 적은 것으로 관찰되었고 보다 쉽게 인지될 수 있었다. LEM으로 고정한 위선암 조직의 미세구조는 보존된 것으로 보였으나 그 고정효과는 2차 원인에 의해 손상되는 것으로 보였으므로 이를 보상하기 위해서 LEM 고정 후 저농도 화학 고정액으로 재차 처리하여 다소의 일정성을 유지할 수 있었으나 위선암 조직은 더 낮은 마이크로파 에너지 요구성이 있는 것으로 생각할 수 있었다. 따라서 암세포가 요구하는 "최소 마이크로파 요구 범위"를 밝히기 위해서 배양 HeLa 세포를 더 낮은 에너지의 마이크로파와 저농도 화학고정액으로 처리한 결과 HeLa세포 미세구조가 보존되는 등 비교적 좋은 효과를 볼 수 있었다. 이 결과로 보면 LEM 조사(照射)로서 생체 저분자 및 수용성 단백질이 crosslink되는 효과가 있는 것으로 보았고 이를 저농도 화학 고정액으로 재차 고정하는 방법으로서 미세구조 및 항원성 보존 효과가 있는 것으로 사료되었으므로 이에 대하여 논의하고자 하였다.
Keywords
- Adenocarcinoma;
- Anti-human p53;
- Anti-human c-erbB-2;
- HeLa cell;
- Immunohistochemistry;
- Microwave fixation