본 實驗에서는 Ca, BSA, heparin과, 精液의 體外貯藏, 및 수소개체가 新鮮精子 및 卵乳液에 부유되어 5$^{\circ}C$에서 4시간 貯藏된 貯藏精子의 活力과 尖帽反應에 미치는 影響을 조사하였던 바, 그 結果는 다음과 같다. 1. Ca, BSA, Ca + BSA, heparin, heparin + Ca, heparin + BSA 및 heparin + Ca + BSA가 첨가된 SCS에서 15분간 培養한 精子의 活力은 처리간에 유의차가 인정되었으며, BSA가 다른 처리보다 유의하게 높았다. 한편 精子의 尖帽反應率은 처리간에 유의차가 인정되었으며, BSA와 Ca + BSA가 다른 처리보다 유의하게 높았다. 2. 精子의 活力은 新鮮精液과 貯藏精液 공히 KNC 1이 KNC 2, HOL 1과 2보다 유의하게 낮았으나, 尖帽反應率은 KNC 1이 KNC 2, HOL 1과 2보다 유의하게 높았다. 즉 精子의 活力과 尖帽反應率은 공히 수소개체간에 차이가 있었다. 3. KNC 1과 KNC 2의 新鮮精子를 SCS, SCS + Ca, SCS + BSA, SCS + Ca + BSA, SCS + heparin, SCS + heparin + Ca, SCS + heparin + BSA 및 SCS + heparin + Ca + BSA 용액에 각각 15분간 培養하였을 때, 精子의 活力은 수소개체간에 유의한 차이가 있었는데, KNC 1에서는 BSA가 다른 처리보다 유의하게 높았으나, KNC 2에서는 BSA, Ca + BSA 및 Ca이 다른 처리보다 유의하게 높았다. 한편 精子의 尖帽反應率은 역시 수소개체간에 유의한 차이가 있었으며, KNC 1에서는 Ca이, KNC 2에서는 Ca + BSA가 다른 처리보다 높았다.
PA를 분석하기 위하여 효소면역측정법을 개발하고자 하였다. Bc방법과 Po방법으로 BSA에 PA를 conjugation하여 각각의 PA-BSA conjugate(PA-BSA[Bc]와 PA-BSA[Po])를 제조하였으며, 이를 토끼에 면역하여 항PA-BSA 항체를 얻었다. 항PA-BSA[Po] 항체를 사용한 ciELISA의 결과에서 경합반응이 제대로 일어나지 않았기 때문에, 식품 속에 있는 PA를 검출하기 위해서 PA-BSA[Po]을 코팅한 후 항PA-BSA[Bc] 항체를 사용하였다. 이 결과에서 PA의 검출한계가 1 ppm인 것을 확인할 수 있었으며, 교차반응을 통해 PA 유도체들에 대해서도 항PA-BSA[Bc] 항체가 PA에 대해 특이성이 매우 강하였다. 또한, MBA의 결과에서는 그 검출한계가 10ppb인 것을 확인할 수 있었다. 분석시료인 계란(109%), 상추(64%), 소간(344%)의 식품시료에 대한 실험에서 상추를 제외하고는 ciELISA는 MBA의 결과와 비교해 볼 때 양호한 결과를 얻을 수 있었다. 그러므로, ciELISA는 MBA보다 분석시간, 교차반응 등의 면에서 장점이 있어 식품 중 PA의 검출에 효과적으로 활용할 수 있을 것이다.
방사선 그라프트 중합법을 적용하여, 폴리에틸렌 다공성 중공사막에 전자선을 조사시킨 후, glycidyl methacrylate(GMA)를 그라프트 중합하였다. 그 후, 음이온 교환기로서 diethylamine (DEA), triethylamine (TEA)를 도입시켜 2종류의 음이온 교환막을 합성하였다. DEA막과 TEA막의 이온교환 밀도는 3.4 mmol/g, 1.74 mmol/g으로 DEA막이 TEA막보다 높은 이온교환기를 얻을 수 있었다. 이 2종류의 음이온교환막에 단백질(bovine serum albumin, BSA)을 투과법에 의해 고정시켜 BSA 고정막을 만들었다. DEA-BSA막의 경우, 그라프트 체인에 BSA가 8층 이상으로 다층 흡착하였으나, TEA-BSA막의 경우, 강한 음이온에 의해 다층 흡착이 이루어지지 않았다. DEA-BSA막의 경우, BSA 다층 흡착성 고정을 나타내기 때문에 L-Trp가 D-Trp보다 더 강한 흡착 특성을 나타내었다. L, D-Trp 이성질체 혼합물을 투과시킨 BTC에 있어서, DEA-BSA 막의 경우, BSA에 대한 L-Trp와 D-Trp의 키랄 인식이 다르기 때문에 2단계의 BTC곡선을 얻을 수 있었다.
Kim, Chong-Kook;Kim, Han-Sung;Lee, Beum-Jin;Han, Jeong-Hee
Archives of Pharmacal Research
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제14권4호
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pp.336-341
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1991
The effect of bovine serum albumin (BSA) on the encapsulation efficiency and stability of liposomes containing methotrexate (MTX) having different surface charges and cholesterol contents were investigated. The encapsulation efficiency of MTX was lower and the release of MTX was faster by the addition of BSA. The leaking of MTX from lipid bilayer depends upon the BSA concentrations. These results may be derived from the interaction of BSA with lipid bilayers. The dynamic structural changes of BSA were monitored indirectly using circular dichroism spectra. Observed dynamic structural changes of BSA with liposomes are presumed to reflect the interaction of BSA with liposomes. Negatively charged liposomes have more strong interaction with BSA than neutral and positively charged liposomes. BSA attacks lipid bilayers whether it is at the inner or at the outer phase of lipid bilayer and induces leakage of entrapped MTX. Especially, negatively charged liposomes are more sensitive than others. The inclusion of cholesterol in the lipid layers inhibits the interaction of BSA with liposomes and shows protective effect against BSA-induced leakage of MTX. To endure the attacking of BSA liposomes as drug carriers should be made using cholesterol.
전기방사법을 이용하여 제조된 pelyestersulfone (PES)-bovin albumin serum (BSA) 친화막에 대하여 L-tryptophan에 대한 흡착특성을 연구하였다. FESEM과 Image Analyzer를 이용하여 방사조건에 따른 섬유의 직경분포를 비교분석 함으로써 섬유의 직경을 조절할 수 있음을 알았다. 또한, 2,2,3,4,4,4-Hexafluoro-1-butanol (HFB)와 BSA의 함량증가에 따른 미세섬유 발생빈도가 높아져서 Darcy 투과도, 기계적 물성, 발수성이 증가한다는 것을 알았다. L-tryptophan의 용출량은 tris-HCl 완충용액보다 borate-DMSO 완충용액에서 높았으며, A 8022형 BSA보다 A 7906형 BSA가 높은 용출량을 보였다. 이러한 결과는 BSA의 종류에 따른 그 특성에 기인하는 것으로 A 7906형은 A 8022형보다 순도가 높고 분자량 분포가 고르며, 사용 pH 환경이 더욱 안정적이기 때문이다.
Reactions between gold (Au) surface plasmon resonance (SPR) chips and bovine serum albumin (BSA) dissolved in solutions of different pH were investigated. The charge on the BSA depends on the pH of the solution in which it is dissolved. Thus, dissolving BSA in different pH solutions resulted in different charges of BSA. Among the BSA dissolved in solutions with pH 4.01, 7.4, and 10.01, the SPR response was the highest for BSA dissolved in the solution of pH 4.01. To eliminate the response variation owing to the difference in the refractive indices of the solutions, phosphate buffered saline (PBS) was injected into the system after the reaction of BSA with the Au SPR chip had happened. In this case too, the BSA dissolved in the solution with pH 4.01 exhibited the highest response. This may be attributed to the non-uniform distribution of ionic patches on the BSA, which can induce electrostatic attraction to the surface even though BSA has a positive charge at pH 4.01, and the absolute values of the net charge of BSA at pH 4.01 and 7.4 were very close.
To better understand the effects of PEGylation and biotinylation on the delivery efficiency of proteins, the cationic protein lysozyme (LZ) and anionic protein bovine serum albumin (BSA) were chemically conjugated with poly(ethylene glycol) (PEG) and biotin-PEG to primary amine groups of proteins using N-hydroxysuccinimide reactions. Four types of protein conjugates were successfully prepared: PEGylated LZ (PEG-LZ), PEGylated BSA (PEG-BSA), biotin-PEG-conjugated LZ (Bio-PEG-LZ), and biotin-PEG-conjugated BSA (Bio-PEG-BSA). PEG-LZ and Bio-PEG-LZ exhibited a lower intracellular uptake than that of LZ in A549 human lung cancer cells (in a two-dimensional culture). However, Bio-PEG-BSA showed significantly improved intracellular delivery as compared to that of PEG-BSA and BSA, probably because of favorable interactions with cells via biotin receptors. For A549/fibroblast coculture spheroids, PEG-LZ and PEG-BSA exhibited significantly decreased tissue penetration as compared with that of unmodified proteins. However, Bio-PEG-BSA showed tissue penetration comparable to that of unmodified BSA. In addition, citraconlyated LZ (Cit-LZ) showed reduced spheroid penetration as compared to that of LZ, probably owing to a decrease in protein charge. Taken together, chemical conjugation of targeting ligands-PEG to anionic proteins could be a promising strategy to improve intracellular delivery and in vivo activity, whereas modifications of cationic proteins should be more delicately designed.
The aim of this study was to determine the interactive effects of BSA and EGF on the viability and development of porcine diploid parthenotes developing in vitro. The addition of 0.1 and 0.4% BSA to the culture medium enhanced the development of 4-cell parthenotes to the blastocyst stage but EGF had no effect. However, while BSA also increased cell numbers, it did so only when EGF was also present. Either agent on its own had no effect. Similarly, apoptosis in the blastocysts was not influenced by either agent on its own but was reduced when both BSA and EGF were present. Furthermore, semi-quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) revealed that EGF enhanced the mRNA expression of BclxL in the presence of 0.4% BSA but BSA and EGF alone had no effect. EGF and/or BSA did not influence Bak gene expression in the blastocyst stage parthenotes. These results suggest that BSA has both beneficial and detrimental effects on the viability of porcine diploid parthenotes developing in vitro and that exogenous EGF may block some of the detrimental effects of BSA, possibly by inhibiting the BSA-induced apoptosis by increasing Bcl-xL expression. This results in a net increase in cell numbers in porcine diploid parthenotes developing in vitro.
BSA, egg albumin (EA), 그리고 분리대두단백질(SPI)의 Neutrase에 의한 탈아미드화가 용해도에 미치는 영향을 조사하여 보았다. BSA는 탈아미드화로 pH 4~8 사이의 물에 대한 용해도가 천연 BSA에 비하여 98~83%로 감소하였으며, pH 6 부근에서 가장 낮은 용해도를 보았다. 천연 BSA와 탈아미드화된 BSA 모두 0.2M NaCl 용액에서는 100%의 용해도를 보였으나, 산성 1.0M
NaCl용액에서는 용해도가 모두 크게 떨어졌다. EA의 용해도는 탈아미드화로 pH3 이하와 6 이상의 수용액에서는 증가하였으나, 산성 NaCl용액에서는 크게 감소하였다. SPI는 탈아미드화로 수용액에서의 용해도가 모든 pH 범위에서 크게 증가하였으나, NaCl용액에 대한 용해도는 pH 6 이상에서는 증가하였고, pH 5 이하에서는 변화가 없었다.
Lee, S. K;Kim, D. H.;G. S. Im;B. C. Yang;Park, H. S.;W. K. Chang;Lee, H. T.
한국가축번식학회지
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제27권4호
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pp.339-347
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2003
The purpose of this study was to investigate the development of bovine nuclear transfer (NT) embryos cultured in serum-free conditions. Bovine NT embryos cultured in various culture conditions were compared blastocyst development, total cell number and apoptosis using TUNEL assay. In experiment 1, blastocyst rates of NT embryos were significantly higher (P<0.01) in FBS (22.0%) and BSA (26.6%) groups than in PVA (6.3%) group. Total cell number was significantly higher in FBS (78.4$\pm$19.4) and BSA (90.9$\pm$29.1) groups than in PVA group (46.0$\pm$0.0). Apoptotic cell number was significantly fewer in FBS (3.1$\pm$1.4) and BSA (1.7$\pm$1.4) groups than in PVA group (7.0$\pm$20.0) However, all of results were not different between the FBS and BSA group. In experiment 2, blastocyst rates of NT embryos were significantly higher (P<0.05) in fatty acid free-BSA (FAF-BSA) group (26.8%) than in fraction V-BSA group (11.2%). Total cell number were somewhat higher in FAF-BSA group (89.8$\pm$30.7) than in fraction V-BSA group (88.1$\pm$19.3). Apoptotic cell number were somewhat fewer in FAF-BSA (1.7$\pm$1.5) group than in fraction V-BSA group (4.2$\pm$2.9). These findings suggest that serum free condition were effective for the in vitro development of bovine NT embryos. Therefore, we concluded that fatty acid free-BSA has beneficial effect in development bovine NT embryos and can be use as a serum substitute.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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