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내열성 효소를 이용한 전분으로부터 6-인산과당의 제조 (Production of Fructose 6-Phoschate from Starch Using Thermostable Enzymes)

  • 권규혁;차월석;김복희;신현재
    • KSBB Journal
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    • 제22권5호
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    • pp.345-350
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    • 2007
  • 인산당은 모든 유기체에서 발견되며 무척 다양한 유용성을 지니고 있다. 특히 glucose 1-phosphate (G1P), glucose 6-phosphate (G6P), fructose 6-phosphate (F6P) 등은 해당과 정, 당합성과정, 5탄당 인산화과정 및 캘빈회로와 같은 탄수화물 대사와 에너지 생산 대사의 주요한 핵심 중간물질이다. 특히 해당과정에서 F6P는 G6P의 이성질화반응에 의하여 생성된다. F6P의 대량생산은 전분을 이용하는 것이 가능한데, 우선 전분에 인산화효소를 가하여 G1P를 얻고, 이 G1P를 자리옮김효소 (phosphoglucomutase, GM)와 이성질화효소 (phosphoglucoisomerase, GI)를 순차적으로 적용하여 G6P와 F6P를 생산하게 된다. 효소반응의 경우 전분의 용해도 증가, 반응속도의 향상 및 미생물의 오염방지 등을 위하여 중온성 효소보다는 고온성 효소 혹은 내열성 효소가 선호된다. 본 연구는 세 가지 내열성 효소를 이용하여 전분으로부터 두 단계반응으로 F6P를 생산하는 것에 관한 것이다. 실험에 사용된 효소는 대장균에서 발현된 재조합 효소로서, 효소의 생산은 유가식 배양을 이용하였다. 1.2% 가용성 전분 200 L를 이용하여 1,253 g의 순수한 G1P를 생산하였으며 이를 이용하여 최종적으로 30% 수율로 F6P를 생산할 수 있었다. 최대수율을 얻기 위하여 반응표면분석법을 이용하여 GM : GI = 1 : 1.23, 63.5$^{\circ}C$, pH 6.85의 조건이 도출되었으며, 이 조건하에서 실험을 통하여 20 g/L의 전분을 이용하여 30% 수율로 F6P가 생성됨을 확인할 수 있었다.

Prognostic Value of Phosphorylated mTOR/RPS6KB1 in Non-small Cell Lung Cancer

  • Zhang, Yong;Ni, Huan-Juan;Cheng, De-Yun
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제14권6호
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    • pp.3725-3728
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    • 2013
  • Background: The mammalian target of rapamycin (mTOR) /RPS6KB1 activation has recently been implicated in tumour development, but its role in lung cancer remains unclear. The aim of this study was to explore the role of mTOR/RPS6KB1 signaling pathway in non-small-cell lung cancer (NSCLC). Methods: Immunohistochemistry was performed to assess the expression of phosphorylated mammalian target of rapamycin (p-mTOR) and its downstream ribosomal phosphorylated RPS6KB1 (p-RPS6KB1) in NSCLC patients. We also analyzed p-mTOR/p-RPS6KB1 protein expression in 45 fresh NSCLC tissues using Western blotting. Results: The expression level of p-mTOR and p-RPS6KB1 was significantly higher in NSCLC tumor specimens than that in adjacent noncancerous normal lung tissues (P<0.01). p-mTOR expression correlated with p-RPS6KB1. Furthermore, high expression level of p-mTOR or p-RPS6KB1 in NSCLC was associated with a shorter overall survival (both P<0.01). Multivariate analysis indicated high level of p-mTOR expression was an independent prognostic factor (HR=2.642, 95%CI 1.157-4.904, p=0.002). Conclusions: p-mTOR and p-RPS6KB1 could be useful prognostic markers for NSCLC.

비타민 B6 부족이 정기적인 운동 훈련시 연료의 이용과 혈액 콜레스테롤 성상에 미치는 영향 (The Effect of Vitamin B6 Deficiency on the Utilization of Fuel and Blood Cholesterol Profile with Regular Exercise-Training in Rats)

  • 조윤옥
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제29권8호
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    • pp.881-888
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    • 1996
  • The purpose of this study was to determine whether vitamin B6(B6) deficiency affects fuel utilization and blood cholesterol profile with exercise-training. Twenty-four rats were fed a B6 deficient(-B6) diet or a control (+B6) diet for 5 weeks and either exercised(EX) or nonexercised (NE). EX rats were exercised on treadmill(10$^{\circ}$, 0.5-0.8km/h) for 20 minutes everyday. Glucose(GLU), glycogen (GLY), protein(PRO), trglyceride(TG), free fatty acid(FFA), total cholesterl(TC), HDL-cholesterol(HDL-C) and LDL-choleterol(LDL-C) were compared in plasma(P), liver(L) and skeletal muscle(M) of rats. There was a vitamin effect on the level of P-GLU, P-TG, M-TG, L-GLY, L-PRO and an exercise effect on the level of P-PRO, P-FFA, M-PRO, L-GLY, L-TG, P-TC, P-HDL-C, P-LDL-C. Compared to +B6 rats were lower and there were no differences in P-GLU, P-FFA, P-TG. M-GLY, L-TG, P-TC and P-HDL-C. In EX group, the level of P-TG was higher and M-PRO was lower in -B6 rats. There were no differences in M-GLY, L-TG, P-TC and P-HDL-C. These results suggest that a lowered intake of vitamin B6 may impair the adaptation of animals to fuel metabolism related to a decrease of fatty acid oxidation and attenuates the exercise-traning effect on blood lipid profile.

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Arylation of Styrene by Palladium Acetate-Phosphine Complexes

  • 황박영애;황성원
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제18권2호
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    • pp.218-221
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    • 1997
  • When phenylation of styrene was carried out in the presence of Pd(OAc)2 and PPh3 in benzene, trans-stilbene was obtained in good yield (566%) with high selectivity (98%) under mild condition (55 ℃, 50 psi O2, 20 h). Since trans-stilbene could be produced not only from benzene but also from phenyl group of PPh3 by migration of its phenyl group to Pd, the competitiveness of benzene and the migratory aptitude of aryl group of triarylphosphine toward styrene has been investigated with various phosphines (PR3: P(p-C6H4CH3)3, P(p-C6H4OCH3)3, P(p-C6H4F)3, P(p-C6H4Cl)3, P(C6H5)3, P(C6H11)3, P(OC4H9n)3, P(CH2C6H5)3 and P(C6F5)3). The yield and selectivity toward trans-stilbene are increased as the basicity of the phosphines increases. The composition of arylated olefin from arylphosphine, in turn, increases as the electronegativity of the substituent on the aryl group of arylphosphines increases.

SCK 선암세포주에서 방사선 조사에 의해 유도되는 Apoptosis에 미치는 암유전자의 발현 (The Expression of Oncogenes on the Radiation-induced Apoptosis in SCK Mammary Adenocarcinoma Cell Line)

  • 이헝식;박홍규;문창우;윤선민;허원주;정수진;정민호;이상화
    • Radiation Oncology Journal
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    • 제17권1호
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    • pp.70-77
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    • 1999
  • 목적 : 연구자들은 배양 배지의 산성환경이 SCK 선암세포에서 apoptosis를 유도하는 것과 산성환경이 SCK 선암 세포주에서 방사선에 의해 유도되는 apoptosis를 억제시킨다고 관찰하고 apoptosis 관련 유전자들인 p53, p21/WAF/CIP, Bcl-2 및 Bax 들의 발현과 배양 배지 pH 환경과의 연관성을 관찰하였다. 대상 및 방법 : SCK 선암 세포주를 체외 방사선 조사기를 이용하여 방사선 120Gy 조사 후 규정된 시간에 DNA fragmentation을 전기 영동으로 관찰하였다. 실험 조작으로 apoptosis가 유발된 세포군을 정량적으로 분석하고 세포주기 분석을 위하여 FACScan을 이용하였다. Apoptosis 관련 유전자들인 p53, P21/WAF/CIP, Bcl-2 및 Bax 들의 발현은 western blot으로 관찰하였다. 결과 : SCK 선암 세포주에서 방사선에 의해 유도되는 apoptosis는 산성환경(pH 6.6)에서는 apoptosis의 유발이 억제 된다는 사실을 관찰할 수 있었다. 세포주기 분석에서는 방사선조사 후 apoptosis가 뚜렷히 관찰된 pH 7.5 배양 배지 조건에 비하여 pH 6.6 배양 배지 조건에서 현저한 G2/M arrest가 관찰 되었다. apoptosis 관련 유전단백 분석에서는 Bcl-2 유전단백은 두 군 공히 발현의 차이를 관찰할 수 없었고, p53 및 p21은 pH 7.5 배양 배지 환경에서 뚜렷한 발현의 증가를 관찰하였고, p21은 pH 6.6 배양 배지 환경에서는 발현을 관찰할 수 없었다. Bax는 pH 7.5 배양 배지 환경에서 pH 6.6 환경에 비해 경미한 발현의 증가 및 지속성을 관찰하였다. 결론 . 저자들은 SCK 선암 세포주를 대상으로 방사선조사 후 상이한 pH 7.5 와 6.6의 배양 배지 조건에 따른 apoptosis의 관찰에 영향을 주는 유전자 발현에 관한 연구에서 Bcl-2 family의 발현에 비해 세포주기 관련 유전단백들인 p53 발현과 이에 따른 p21의 발현차이가 확연한 p53-dependent apoptotic pathway를 확인하였다. 방사선 조사 후 pH 6.6의 배양 배지 조건에서의 apoptosis 현상을 관찰할 수 없었던 이유는 pH 6.6의 경우 50-60$\%$의 세포가 G2/M arrest에서 세포주기를 순환하지 못함을 확인하였기에 G2/M arrest의 해지와 더불어 순환되는 세포주기의 결과에 따른 post-mitotic apoptosis 현상의 장애로 추론하였다.

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P2Y6 수용체 길항제의 파골세포 분화 촉진 효과 규명 (The Stimulatory Effect of P2Y6 Receptor Antagonist on RANKL-induced Osteoclastogenesis)

  • 노아롱새미;문미란;임미정
    • 약학회지
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    • 제59권5호
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    • pp.207-214
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    • 2015
  • P2Y receptors, a type of P2 receptor family, are G-protein coupled receptors and 8 subtypes have been characterized ($P2Y_1$, $P2Y_2$, $P2Y_4$, $P2Y_6$, $P2Y_{11-14}$). Recently, several studies have shed light on the role of P2Y receptors in bone biology. Among them, little is known on the role of $P2Y_6$ receptor on osteoclast differentiation. Thus, we investigated the role of $P2Y_6$ receptor on osteoclastogenesis using $P2Y_6$ receptor selective antagonist, MRS 2578. When osteoblasts and bone marrow cells were co-cultured in the presence of $VitD_3$ and $PGE_2$, $P2Y_6$ antagonist increased the formation of TRAP positive osteoclasts. To elucidate the target cells of $P2Y_6$ antagonist, we first checked the effect of MRS 2578 on osteoblasts. Treatment of MRS 2578 did not affect OPG : RANKL mRNA ratio in osteoblasts. Next, we checked the effects of $P2Y_6$ antagonist on osteoclast precursors using mouse bone marrow macrophages (BMMs). Addition of MRS 2578 increased the number of osteoclasts in RANKL-treated BMMs. Although $P2Y_6$ antagonist had no effect on RANKL-induced NFATc1, c-Fos and MafB expression levels, it significantly stimulated RANKL-induced Blimp1 mRNA expression in BMMs. Taken together, these data indicate that $P2Y_6$ antagonist increases osteoclast formation by upregulation of Blimp1 expression.

Pseudomonas putida에서 분리한 SAL 플라스미드의 특성 (Characterization of SAL plasmid isolated from Pseudomonas putida)

  • 김희윤;임영복;이영록
    • 미생물학회지
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    • 제25권1호
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    • pp.9-16
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    • 1987
  • 분리한 살리실산 자화세균 중 플라스미드블 갖는 세 균주를 션별하였다. 세 균주, KU801(pKUs, pKUS) , KUS03(pKU6 pKU9), KUS06(pKU7, pKU10)는 각각 두 개씩의 플라스미드플 가지고 있음이 전기갱동에 의해 밝혀졌고, Pseudomoηas putida로 동정되었다. 세 문주들은 모두 암피실린, 터l트라사이클린, 클로람페니콜등의 항생제에 대하여 내성을 지니며, 조사 된 방화족과 지방족 탄화수소들 중 삼리실산과 그의 중간 대사물인 카터1콜만을 이용하있다. 큰 분자량의 플라스비드(pKUS, p pKU6, pKU7)는 마이로마이신 C로 처리하였을때 큐어되며 그 빈도는 각각 0.40%, l,67%, 0.7S% 이었다. 큐어된 균주는 상리실산을 분해하지 못하였으나, 여전히 야생균주와 동일한 항생제 내성을 가지고 있었다. 살리실산 분해에 관여하는 유전자가 그들 플라스미드에 있는 것으로 판명되었다. pKU5와 pKU6의 분자량은 103, SMd, pKU7의 분자량은 101Md으로 측정되었다. SAL 플라스미드인 pKU5, pKU6, pKU7은 접합에 의해 P.putida와 P.aeruginosa로는 전달되었으나, E. coli에서는 발현되지 아니하였다.

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cPCR 기법을 이용한 초기배양 pH에 의한 반추위 섬유소 분해 박테리아의 부착 및 발효에 관한 연구 (Study on Rumen Cellulolytic Bacterial Attachment and Fermentation Dependent on Initial pH by cPCR)

  • 김민석;성하균;김현진;이상석;장종수;하종규
    • Journal of Animal Science and Technology
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    • 제47권4호
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    • pp.615-624
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    • 2005
  • 본 연구는 배양초기 pH 조건이 F. succino- genes의 섬유소 부착과 섬유소 소화에 미치는 영향을 보고자 실시하였다. 선정된 specific primer를 이용하여 F. succinogenes의 genomic DNA로부터 445bp의 16S rDNA 절편을 증폭하여 205bp의 internal control을 제작하였고, cPCR 결과로부터 박테리아 수를 계산할 수 있는 표준곡선의 회귀식($r^2$>0.99)을 얻을 수 있었다. In vitro 배양초기 pH에 따른 F. succ- inogenes의 cellulose 부착을 cPCR로 모니터링한 결과, 발효과정 전 기간동안 초기 pH가 6.8과 6.2일 때 cellulose 건물 g당 부착 균주의 수가 pH 5.6일 때 보다 높았으나, pH 6.8과 6.2 사이에서는 큰 차이는 없었다(p>0.05). Cellulose 분해는 배양시간이 진행됨에 따라 증가 되었으며, 분해 정도는 pH가 증가함에 따라 더 높았다. 배양초기 pH가 6.8, 6.2 그리고 5.8일 때 48시간동안 감소한 pH는 각각 0.24, 0.58 그리고 0.16 이었다. 가스 생산량은 발효 시간이 경과함에 따라 pH가 높을수록 더 많았다. 결론적으로 발효 초기 pH는 F. succinogenes에 의한 cellulose 소화, 가스 생산, pH 변화 및 cellulose 부착에 큰 영향을 주었으며, 특히, 낮은 pH(5.8)에서는 섬유소 소화 및 박테리아 부착을 현저한 감소 시켰다.

Role of CaBud6p in the Polarized Growth of Candida albicans

  • Song Yun-Kyoung;Kim Jeong-Yoon
    • Journal of Microbiology
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    • 제44권3호
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    • pp.311-319
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    • 2006
  • Bud6p is a component of a polarisome that controls cell polarity in Saccharomyces cerevisiae. In this study, we investigated the role of the Candide albicans Bud6 protein (CaBud6p) in cell polarity and hyphal development. CaBud6p, which consists of 703 amino acids, had 37% amino-acid sequence identity with the Bud6 protein of S. cerevisiae. The homozygous knock-out of CaBUD6 resulted in several abnormal phenotypes, such as a round and enlarged cells, widened bud necks, and a random budding pattern. In hypha-inducing media, the mutant cells had markedly swollen tips and a reduced ability to switch from yeast to hypha. In addition, a yeast two-Hybrid analysis showed a physical interaction between CaBud6p and CaAct1p, which suggests that CaBud6p may be involved in actin cable organization, like Bud6p in S. cerevisiae. Taken together, these results indicate that CaBud6 plays an important role in the polarized growth of C. albicans.

Staphylococcus aureus의 항생제 내성 plasmid에 관한 연구 (R-plasmids in staphylococcus aureus)

  • 변우현;김영선;조은희;권동현;이호주;홍순주
    • 미생물학회지
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    • 제23권4호
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    • pp.282-290
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    • 1985
  • Small size antibiotic resistance plasmids having molecular weights less than 10 Mdal were isolated and characterized from ten clinically isolated multiple resistant Staphylococcus aureus. Agarose gel electrophoresis profiles and antibiotic resistance patterns divided these strains into four groups. Strain 2-23-6, the representative strain of a group of five strains conferred two plasmids of molecular weights $1.6{\times}10^6\;dal\;and\;2.0{\times}10^6$ dal. The small plasmid (pSBK 112) specified macrolides, lincosamides and streptogramin type B (MLS) resistance gene which are expressed constitutively. Lage plasmid (pSBK 125) specified chloramphenicol resistance gene which is inducible. Strain 10-5 conferred a $3.0{\times}10^6$ dal plasmid (pSBK 141) which carry an inducible ampicillin resistance gene and strain P-H-2 conferred and $1.6{\times}10^6$ dal plasmid (pSBK 190) which carry a constitutive MLS resistance gene. Strain D-H-1 conferred four plasmids of molecular weights $0.8{\times}10^6$ dal (pSBK 201), $1.6{\times}10^6$ dal (pSBK 202), $2.5{\times}10^6$ dal (pSBK 203), and $1.2{\times}10^7$ dal (pDBK 204), respectively. Among those four plasmids, only pSBK 203 specified chloramphenicol resistance gene. Curing of constitutive MLS resistance using acriding orange or ethidium bromide in 2-23-6 and P-H-2 strains produced 'inducible' MLS resistance strains which are less resistant to MLS than the wild type strains, suggesting that there are two resistance genes in both strains; one is constitutive and the other is inducible.

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