• 미생물학회지
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• 제36권2호
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• pp.91-96
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• 2000

불와전 균류인 Fusarium s^g pp.를 이용하여 여러 가지 배양조건과 생리적 영향에 따른 균주의 성장 및 T-2 toxin의 생성에 관하여 고찰하였다. T-2 toxin 의 검출방법은 thin layer chromatography (TCL) 법과 미생물학적 검출방법을 사용하였다. 고체 배지의 경우 횐옥수수 가루(Quaker사 제품)베지에서 다른 곡물보다 많은 양의 T-2 toxin이 생성되었으며,비교적 깨끗한 T-2 toxin이 정제되었다. 이 경우 배지 100g당 약 700 mg의 T-2 toxin이 생성되었으며, 그중 약 30%정도가 깨끗한 결정으로 정제되었다. 고온(20-$25^{\circ}C$)에서는 생장은 많았으나, T-2 toxin의 생성은 적었으며, 저온(10-$15^{\circ}C$)에서는 비교적 생장이 적었지만, T-2 toxin의 생성이 많았고, 젖당, 글리세롤, 솔비톨의 경우는 적었다. 유일 탄소원으로 구연산과 초산은 이용하지 못하였으며, 녹발의 경우 생장은 많았으나 T-2 toxin의 생성양은 적었다. 질소원의 경우 $NaNO_2$를 제외하고는 $(NH_4)_2NO_4$, $NH_4Cl_3$, $NH_4NO_3$, $KNO_3$ 를 거의 동일하게 이용하였다. 초기 pH값에 생성과 균주의 성장은 pH4.0-5.0일 경우 최적을 나타냈으며 ph6.0이상에서는 성장도 저하되고, T-2 toxin생성도 적었다. 회전속도에 따른 T-2 toxin 생성과 균주의 성장을 보면 회전속도가 속돠 증가함에 따라 균주의 생장과 T-2 toxin 생성량이 모두 증가하였다. $15^{\circ}C$에서 7일간 배양 후, $25^{\circ}C$로 옮겨 7일간 배양하여, toxin의 생성을 보면, $15^{\circ}C$에 7일간 배양했을 때보다 T-2 toxin양이 적었다. 이는 생성되었던 T-2 toxin이 분해되었음을 보여주는 것이다. 이상의 결과를 볼 때 T-2 toxin 대사 경로는 온도에 의한 효소 억제 또는 효소 유지 시스템에 의해 조절되는 것이라고 생각할 수 있다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권1호
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• pp.108-112
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• 2009

A simplified method for the purification of cholera toxin was developed. The 569B strain of Vibrio cholerae, a recognized hyper-producer of cholera toxin, was propagated in a bioreactor under conditions that promote the production of the toxin. The toxin was separated from the bacterial cells using 0.2-${\mu}m$ crossflow microfiltration, the clarified toxin was passed through the membrane into the permeate, and the bacterial cells were retained in the retentate. The 0.2-${\mu}m$ permeate was then concentrated 3-fold and diafiltered against 10 mM phosphate buffer, pH 7.6, using 30-kDa crossflow ultrafiltration. The concentrated toxin was loaded onto a cation exchange column, the toxin was bound to the column, and most of the impurities were passed unimpeded through the column. The toxin was eluted with a salt gradient of phosphate buffer, pH 7.0, containing 1.0 M NaCl. The peak containing the toxin was assayed for cholera toxin and protein and the purity was determined to be 92%. The toxin peak had a low endotoxin level of $3.1\;EU/{\mu}g$ of toxin. The purified toxin was used to prepare antiserum against whole toxin, which was used in a $G_{M1}$ ganglioside-binding ELISA to determine residual levels of toxin in an oral inactivated whole-cell cholera vaccine. The $G_{M1}$ ganglioside-binding ELISA was shown to be very sensitive and capable of detecting as little as 1 ng/ml of cholera toxin.

• 한국균학회지
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• 제16권1호
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• pp.9-15
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• 1988

H. sativum 배양액에서 두가지 종류의 식물독소물질이 검출되었으며, 이들을 M-toxin과 D-toxin으로 명명하였다. Lettuce 식물반응결과는 D-toxin 보다 뿌리성장의 저해작용이 적었다. 화학분석결과 M-toxin은 특별히 작은 peptid로 되어 있었다. D-toxin는 Helrninthosporal와 화학적 성질이 비슷하였으나 같지는 않았다. 이는 UV, proton NMR와 질량분석기의 기본 자료인 결과이며, D-toxin은 적어도 두개의 isomers로 되어 있었다.

• Journal of Photoscience
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• 제9권2호
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• pp.323-325
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• 2002

Bacillus Anthracis is the causative agent of anthrax. The major virulence factors are a poly-D glutamic acid capsule and three-protein component exotoxin, which is collectively known as anthrax toxin, protective antigen (PA, 83 kDa), lethal factor (LF, 90 kDa), and edema factor (EF, 89 kDa). These three proteins individually have no known toxic activities, but in combination with PA form two toxins (lethal toxin and edema toxin), causing different pathogenic responses in animals and cultured cells. However, it remains to be elucidated for pathogenic mechanism of anthrax toxin. In this study, we constructed toxin component in bacterial overexpression system and purified the native toxin from Bacillus anthracis delta sterne F32 using FPLC system. Recombinant toxin showed high homogeneity and rapid purification processes. Also, this recombinant toxin was comparable to B. anthracis native toxin in terms of cytotoxic effects on cultured cell lines.

• 한국환경보건학회지
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• 제22권1호
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• pp.51-56
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• 1996

In order to detect the T-2 toxin accumulation in the animal tissues, T-2 toxin, produced by Fusarium sporotrichioides M-1-1, was injected to mouse by 0, 1 and 2 mg per kilogram of body weight, respectively, and T-2 toxin extracted from serum and organs were analyzed by the indirected competitive ELISA. The indirect competitive ELISA established in the laboratory can be check less than 0.1 ppb level of T-2 toxin and average recovery of T-2 toxin spiked was 80~113% in animal samples such as serum, liver and kidney. After 6 weeks of treatment with 2 mg of T-2 toxin per kg body weight, T-2 toxin was accumulated in serum (133.0 ng/ml), liver(1.4 ng/g) and kidney(14.3 ng/g) of mouse injected with 2 mg of toxin per kg body weight.

• KSBB Journal
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• 제14권2호
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• pp.241-247
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• 1999

디프테리아는 Corynebacterium diphtheriae에 의해 발생되는 호흡기 질병으로 C. diphtheriae의 exo-toxin을 불활성화 시킨 toxoid 백신을 사용하여 예방해 왔다. 현재까지 국내에서는 정치배양 방법으로 디프테리아 toxin을 생산해 왔기 때문에 생산성과 품질에 한계가 있었으며, 이를 극복하기 위해 발효조를 이용한 발효조건 최적화에 대한 연구를 수행하였다. 디프테리아 toxin을 보다 효율적을 얻기 위한 배지로서 beef antigen이 함유되어 있지 않은 casein 유래의 NZ-Case를 선택하였다. 발효조에 의한 toxin 생성은 세포성장과 함께 증가하는 growh-associated form으로 나타났다. 최대의 세포성장과 toxin 생성은 초기 pH가 7.0인 배지에서 0.22vvm의 통기와 400rpm의 교반조건에서 얻을 수 있었다. 또한 최대의 toxin 생성을 위한 최적의 iron 이온의 농도는 0.3mg/L 이었으며, morgamcphospale의 첨가에 의한 calcium-phosphate 침전이 배지 내에 iron 이온의 농도조절을 위하여 요구되었다. 면역원성을 확인하기 위한 역가시험 결과 발효조 배양에서 얻은 toxoid는 4단위에서 모든 guinea-pigs가 생존하여 2단위인 정치배양 toxin에비해 월등히 우수한 것으로 판단되었다. 결국 발효조 배양으로 toxin을 생산할 경우 부작용이 적고 수율과 생산성 및 면역원성 이 우수한 toxid의 생산이 가능하였다.

• KSBB Journal
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• 제14권2호
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• pp.248-254
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• 1999

본 연구에서는 디프테리아 toxin을 정제한 후 무독화하여 toxid를 생산하기 위하여 crude toxin을 2중 U.F를 통해 분자량 100.000이상의 단백질과 30.000이하의 배지 유래 단백질 및 색소를 제거한 결과 순도 1,300 Lf/mg PN의 toxin을 정제하였다. 이를 다시 DEAE-ion exehange chromatography를 통해 toxin을 정제한 후 무독화하여 순도 2,560 Lf/mg PN의 toxoid를 얻을 수 있었다. 이와 같이 생산된 디프테리아 toxoid는 동물 실험 결과 toxin으로 reversion이 발견되지 않았으며, 역가에 있어서도 crude toxin을 무독화한 후 정제한 toxoid와 비교하여 더 우수하였고 대한민국 생물학적 제제 기준에 규정된 성인용 디프테리아 백신 순도 기준 2,500 Lf/mg PN 이상에 적합하였다. 따라서 본 연구를 통해 성인용 디프테리아 백신의 생산 가능성을 확인하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제26권5호
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• pp.585-589
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• 1994

시험관 내에서 T-2 toxin이 병아리 비장세포의 blastogenesis에 미치는 영향을 살펴본 결과, B-cell mitogen인 lipopolysaccharide 및 T-cell mitogen인 concanavalin A 자극에 대해 T-2 toxin의 농도가 증가함에 따라 억제정도가 증가하는 경향을 나타내었다. 노출시기를 달리하여 T-2 toxin을 투여한 병아리의 비장세포에서 mitogen 자극에 내한 반응을 안아 본 결과, 부화하기 전과 후에 계속 T-2 toxin에 노출시킨 실험군은 가장 영향을 많이 받은 것으로 나타났고 부화전 혹은 부화후 어느 한 시기에만 T-2 toxin에 노출된 실험군은 비교적 영향을 적게 받는 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제10권3호
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• pp.205-209
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• 1982

The enzyme-linked immunosorbent assay using the so-called "double-sandwich"technique was applied to determine Clostridium botulinum type F toxin. Polystyrene tubes were coated with horse anti-type F toxin serum and then toxin sample was added. The tubes were subsequently treated with rabbit anti-type F toxin IgG and sheep anti-rabbit serum IgG-horseradish peroxidase conjugate. By this technique, about 10 mouse intraperitoneal 50% lethal doses (ip LD/50/) of type F toxin could be detected. Low back-ground reading was achieved with the use of phosphate-buffered saline containing 0.05% Tween 20 and 1% bovine serum albumin as diluents of rabbit IgG and conjugate. Addition of EDTA in the diluents of toxin increased ELISA extinction value significantly. No cross-reaction was observed with botulinum type A and B toxin, but type E toxin gave sleight cross-reaction.

• 대한수의학회지
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• 제39권5호
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• pp.1028-1032
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• 1999

Alpha toxin of S aureus has cytolytic activity respectively. This antigen has been received the most attention since it is a major virulence factor in pathogenesis of staphylococcal mastitis. Thus, alpha toxin has been focused as potential candidate of vaccine to minimize mastitis in cows. The purpose of this study was to develop a simple, efficient production and purification methods of sufficient amount of alpha toxin antigen from S aureus. Alpha toxin production measured by hemolytic activity was the highest at 18 hrs postinoculation in yeast extract culture medium supplemented with thiamine, nicotinic acid and casamino acid. Alpha toxin was purified by ammonium sulfate precipitation (65%) and ultrafiltration. Molecular weight of the toxin was 33 kDa in the analysis with SDS-PAGE. Conclusionally, when alpha toxin was included in the vaccine, the optimal harvest time of alpha toxin was at 18 hrs after inoculation in yeast extract medium supplemented with thiamine and nicotinic acid.